綠色熒光蛋白GFP的內源熒光活性和能用來與其他蛋白構建融合蛋白的能力使它成為了一個以及體內生物過程的寶貴工具。如果它們能通過光激活來選擇性的標記蛋白，那么它們的價值就會更大了，Patterson and Lippincott-Schwartz在science上發(fā)表的文章以及實現(xiàn)了這個目標。他們的構思非常巧妙，讓GFP保持在關閉的狀態(tài)，直到被激活。 GFP通常存在兩種形式，中性形式和陰離子形式，分別具有主要的和次要的吸收峰。持續(xù)的400nm光能將GFP主要轉變?yōu)殛庪x子形式，導致次要吸收峰的增加，在488納米激發(fā)后熒光增加3倍。Patterson and Lippincott-Schwartz決定尋找一種減弱次要吸收峰的GFP突變體。他們希望如果存在這種突變體，就可以用400nm的光來進行GFP形式轉變，從而導致488nm激發(fā)后發(fā)射波長的改變。研究者*終找到了這種突變體PA－GFP，203位氨基酸用組氨酸替代，在次要吸收峰幾乎沒有吸收，被400nm進行照射后，次要波長吸收大大增加。他們還發(fā)現(xiàn)PA－GFP光轉變后488nm激發(fā)導致了熒光釋放100倍的增強。 那么這種PA－GFP對活體細胞的研究有什么用處呢？研究者分析了表達PA－GFP的細胞，他們分析不同于野生型GFP，488nm激發(fā)在光轉換之前產(chǎn)生出非常少的熒光信號，而在光轉換后，488nm激發(fā)導致了60倍的發(fā)射增加，野生型的GFP只有2.6倍的熒光增強。 這個新的技術突破必將為分子生物學體內研究帶來新的進展。 　 相關文章及鏈接： ORIGINAL RESEARCH PAPERS Patterson, G. H. & Lippincott-Schwartz, J. A photoactivatable GFP for selective photolabelling of proteins and cells. Science 297, 1873-1877 (2002) | Article | PubMed |